一、實驗目的
植物細胞和組織培養(yǎng)的技術性強，要求無菌操作，通過本實驗可初步掌握常規(guī)的組織培養(yǎng)技術，加深對無菌操作的了解。
二、實驗原理
植物的性：植物體的任何一個細胞都具有生長分化成為一個完整植株的能力，稱為植物的性。
植物組織培養(yǎng)就是利用植物的性進行離體無菌植物培養(yǎng)的一門技術。植物組織培養(yǎng)按其原始意義，就是指愈傷組織培養(yǎng)。但發(fā)展至今，其范圍日益擴大，已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質體的離體無菌培養(yǎng)。因此，擁有幾種不同水平的培養(yǎng)技術，即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質的培養(yǎng)技術。
本實驗選擇豌豆為材料，豌豆(Pisumsativum)屬豆科植物，是糧食、飼料和重要的蔬菜作物，也是遺傳學家和植物生理學家感興趣和樂于采用的實驗植物，豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體，皆可形成愈傷組織，其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養(yǎng)可包括小至十幾微米的莖尖分生組織(生長點)和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養(yǎng)。在實踐應用上，常采用生長點的培養(yǎng)使患病植物去病毒，以達到挽救優(yōu)良品種，提高產量和質量之目的。
三、實驗材料
儀器設備：
1. 酒精燈、三角燒瓶，培養(yǎng)皿。
2. 鑷子、剪刀、剖針。
3. 雙筒解剖顯微鏡。
4. 光照培養(yǎng)箱或溫室。
5. 材料煙草無菌苗、豌豆幼苗。
試劑：
1. MS培養(yǎng)基，植物激素：NAA、6-BA等。
2. 飽和漂液(次氯酸鈉)。
3. 70%酒精、100%酒精、酒精棉球。
4. 無菌水。
四、實驗步驟
豌豆苗的莖尖培養(yǎng)：
1、取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，(此步以后要求無菌)用無菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養(yǎng)皿中。
2、在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長錐，用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個葉原基的生長錐。
3、將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤(6-BA)的培養(yǎng)基上誘導愈傷組織形成，用封口膜將培養(yǎng)皿封好。
4、在恒溫培養(yǎng)箱中，26℃下,培養(yǎng)六周，形成愈傷組織，經(jīng)繼代后，可用于生根培養(yǎng)。
在線咨詢